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新工具轻松分析脑组织的基因表达

时间：2015-10-23 00:00:00 来源：网络整理

对于特定类型的神经元细胞而言，探索基因表达是个十分困难的任务。目前常用的方法有pCR和测序，但这些方法是破坏性的，需要消耗组织，也影响了后续的操作。同时，它们还面临精确分离细胞的挑战。

通常，研究人员采用显微切割来捕获特定样品，不过这会引入样品间的差异，因为你不可能每次都捕获到相同量的表达和非表达细胞。其他的细胞分离方法，如细胞分选等，也未必能捕获一个至纯的细胞群体。对于脑组织而言，这又面临额外的挑战。大脑不仅包含神经元，也包含有着独特性质的其他细胞。而且，大脑的结构特殊，每个区域执行不同的功能，这会影响基因表达。

不过，目前有一种新方法能研究RNA表达，而不破坏组织形态。LGC Biosearch Technologies公司采用RNA荧光原位杂交（FISH）方法，利用Stellaris RNA FISH探针来同时实现细胞定位和表达定量。在培养细胞中，这些探针还能提供单分子的RNA表达模式。

原位杂交是一种检测细胞或组织内的核酸目标的成熟技术。不过，RNA FISH存在一些缺陷，如灵敏度低、操作复杂，检测多个目标的能力有限。而Stellaris RNA FISH检测方法能同时检测和定位固定组织中的单个RNA分子。一个典型的Stellaris探针组最多包含48条荧光标记的寡核苷酸，它们与单个RNA杂交，让信号扩增48倍。

Stellaris技术不需要RNA分离、纯化或扩增，解决了基因表达的许多问题。操作过程十分简单，仅使用常见的试剂。Stellaris RNA FISH适合多种细胞类型和应用，包括公认很难的神经组织。神经组织难以进行原位RNA检测，是因为脂肪含量高，且大脑内的结构很复杂。Stellaris RNA FISH通过一系列措施，克服了这些障碍，让神经学家能够轻松定位多个基因的表达。

挑战

方案

高的脂肪含量

特殊的洗涤步骤能去除组织中的脂肪

内在的自发荧光

固定减少了组织的变化，减弱了自发荧光

细胞定位

RNA FISH是一种原位方法，保留了结构

样品间差异

无需精确的切割

实现高信噪比

专为脑组织切片而优化的洗涤和杂交增强了信号

作为一种简单、经济而又灵敏的FISH方法，Stellaris RNA FISH为神经科学的研究开辟了一条新的道路。目前，研究人员已经利用它来研究Olig2，成熟少突胶质细胞的谱系标志物。此外，人们也将其用在单细胞转录组学的研究，具体案例请看：单细胞转录组学的研究工具盘点。（生物通 余亮）


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