专访：肝癌诊断的生力军——MicroRNA

肝癌早期比较隐匿，患者确诊的时候往往已经到了中晚期。这个时候进行治疗效果当然不会很理想。正因如此，肝癌素有“癌王”之称。不过我们也不必过于害怕，因为越来越多的临床和基础研究证实肝癌“癌王”的地位也并非牢不可破。早发现、早诊断、早治疗可以有效改善肝癌治疗的效果，延长肝癌患者的生命。

第二军医大学东方肝胆外科医院王红阳院士领导的课题组最近在Cancer Letters杂志上发表了一项重要的肝癌研究成果。他们的工作表明，在影像学、AFp检测等传统方法还无能为力的时候，检测血清中的循环microRNA可以提前预警并监测肝癌的发生。这种检测方法非常简便，成本也比较低。将来只需要在医院门诊进行指尖采血，就可以在3小时内得出检测结果。（更多信息请参见：早诊断，将“癌王”拉下马）

生物通有幸邀请到王红阳院士课题组的李亮博士，来跟我们聊一聊肝癌诊断的生力军——microRNA。

作为诊断标志物，microRNA有什么特别？

MicroRNA是长约22nt的非编码RNA，广泛存在于从病毒到人类的各种生物中。这些小RNA能够与mRNA结合阻断相应基因的表达，在胚胎发育、细胞分化、器官生成等重要过程中承担着关键性的调控功能，与包括癌症在内的多种人类疾病有关。

循环microRNA作为新型诊断标志物近年来被广泛报道。李亮博士指出，microRNA的优势主要有以下几点。（一）无创：采取血液样本进行检测，对病人的损伤较小，能够克服创伤性检测带来的风险。（二）稳定：在临床血清、血浆样本中，microRNA以抵抗RNA酶的形式稳定存在。（三）早期：循环microRNA在肿瘤早期阶段（比如癌前状态、极低肿瘤负荷的时候）就已经表现出异常，因此可以用于肿瘤高危人群的预警或者肿瘤早期检测。（四）简便：研究蛋白型的诊断标志物需要制备抗体，而microRNA的研究方法相对简便，发现-验证-应用的周期相对可能更短。

MicroRNA离临床诊断有多远？

李亮博士表示，microRNA作为疾病诊断标志物的研究为时尚短，目前还没有成熟的microRNA诊断产品正式、大规模进入临床。但是相信在科技高度发展的今天，基础研究的成果会比以往更快地应用到实践中来。

“现在，国内外已经有大量与microRNA相关的诊断和治疗专利，有部分研究成果也已经接近于实际应用。举例来说，南京大学张辰宇教授等研制的基于microRNA检测的胰腺癌诊断试剂盒已经顺利通过了国家食药监总局审核，获批三类体外诊断试剂注册证书。我们也在抓紧将microRNA应用于肝癌提前预警的研究结果进行大规模验证，希望能够尽快推向临床，”李亮博士兴致勃勃地说。

哪些检测方法与microRNA更般配？

据李亮博士介绍，microRNA检测方法目前主要有两类：（1）基于探针杂交技术的检测方法：比如Northern blotting法、纳米金标记法以及桥联同位素标记法等。（2）基于扩增反应的检测方法：比如定量pCR法（qpCR）、滚环扩增法以及新一代测序技术等。“在该项研究中，我们主要采用TaqMan探针（qpCR）对血清中的microRNA进行检测。”

李亮博士认为，上述microRNA检测方法各有优缺点，要根据实际情况和研究目的进行采用。举例来说，qpCR法灵敏度和精确度较高，样本需求较少，目前被广泛采用。而新一代测序技术通量高，结果准确，可定量检测未知microRNA，但是检测成本相对较高。

肝癌诊断有哪些新势力？

李亮博士告诉我们，循环microRNA检测是体液活检的重要内容之一。体液活检是指通过患者的血液或者尿液等对癌症等疾病做出诊断。近年来，体液活检技术受到临床上越来越多的重视和推广，被《麻省理工大学科技评论》评为“2015十大突破”之一。今年6月，美国临床肿瘤学会年会（ASCO）上给出的数据也显示，体液活检和传统组织活检的一致性良好。除了microRNA以外，体液活检的检测内容主要还包括血液中游离的循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells, CTCs）、循环肿瘤DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA）、以及外泌体（Exosomes）等。

“新一代测序技术在精准医疗中的应用也步入了学术共识，”李亮博士说。“新一代测序技术是将来实现肝癌的精准分子分型、药靶筛选及疗效判断的重要手段之一。”

李亮博士认为，新型肝癌蛋白标志物的应用也值得期待，比如DKK1和GpC3。国内第一个具有完全自主知识产权的肿瘤病理诊断试剂盒——GpC3检测试剂盒，目前已经获得国家食品药品监督管理总局颁发的医疗器械注册证书，获准用于肝癌的病理诊断和分型。

肝癌诊断将走向何方？

随着科学技术的发展，人们生活水平的提高，现在我们已经逐渐走入了 “4p医学”时代，即“预防性（preventive）、预测性（predictive）、个体化（personalized）和参与性（participatory）”医疗。其中首要的就是预防、预测疾病的发生。

在“4p医学”时代，提早预警和精确诊断是未来肝癌诊断的发展趋势之一。李亮博士满怀憧憬地说：“提早预警有利于疾病预防以及早期治疗，具有深远的社会和经济价值。精确诊断是精准治疗的前提，在将来，我们不仅要准确地诊断肝癌，还要精准判断肝癌的分子分型等个体化信息，为肝癌的个体化治疗提供依据。”

今年5月，中国医师协会临床精准医疗专业委员会正式成立，王红阳院士任主任委员。这一重大事件标志着中国精准医疗临床应用进入了实施阶段。

作者简介：

王红阳教授：中国工程院院士，发展中国家科学院院士，教育部长江“特聘教授”。现任国家肝癌科学中心主任、教育部“肝癌分子网络调控与靶向干预”重点实验室主任、上海市肝胆肿瘤生物学重点实验室主任、国际合作生物信号转导研究中心主任；兼任国家自然科学基金委医学科学部主任、全国生物化学与分子生物学学会副理事长、全军生化专业委员会主任委员。

王红阳院士长期从事肝癌的基础与临床研究，在Cancer Cell、Nature cell bio.、J.E.M. Gastroenterology、Gut、Hepatology、Cancer Res、Nature 和Oncogene等有影响力的主流期刊发表论文近200篇；已获授权国、内外发明专利13项。先后主持国家传染病重大科技专项课题、国家自然科学基金创新研究群体、重点项目、杰出青年基金等项目。以第一完成人获国家科学技术创新团队奖、国家自然科学二等奖、何梁何利科技进步奖、上海医学科技一等奖、树兰医学奖等。

李亮，男，1982年11月2日出生于湖南岳阳，汉族，中共党员。2006年本科毕业于第二军医大学海军临床医学系；2012年博士毕业于东方肝胆外科医院肿瘤学专业，导师王红阳院士，同年任该院生物信号转导研究中心助理研究员至今。

李亮博士的主要研究方向为“炎症性肝病与肝癌的早诊、早治，机制研究”。目前主持国家自然科学基金委青年基金项目一项，主持上海市卫计委科研课题青年项目一项，并作为项目骨干参与了“十二五”国家科技重大专项课题。李亮博士目前发表第一作者SCI论著9篇，相关文章发表于“Gut”、“Hepatology”、 “Journal of virology”以及“Cancer letters”等知名医学期刊上，单篇最高中英文引用94次。目前申请国家发明专利四项，参编专著“细胞信号转导-基础理论与实用技术”。李亮博士获军队集体一等功一次；获全军优秀博士学位论文奖以及上海市研究生优秀博士学位论文奖；获评第二军医大学“吴孟超式优秀青年”；任中国抗癌协会肿瘤转移专业委员会青年委员。

生物通编辑：叶予

生物通推荐原文：Li L et al. Cancer Lett. 2016 Apr 10;373(2):234-40.