三孩政策下，看辅助生殖技术如何实现“好孕自然来”？

想必前段时间，大家都被这条消息刷屏：

5月31日，中共中央政治局会议审议《关于优化生育政策促进人口长期均衡发展的决定》，提出进一步优化生育政策，实施一对夫妻可以生育三个子女政策及配套支持措施。

优生优育的有效手段之一---辅助生殖技术

根据第七次全国人口普查数据显示，我国目前呈现出生育率下降、老龄化水平升高的人口结构特点。实施三孩生育政策，有利于改善人口年龄结构，降低老龄化峰值水平，促进人口长期均衡发展。

三孩政策的落地，离不开政策及配套支持措施的实施。除了托幼、教育等的配套支持，医疗的支持也十分重要。“三孩”时代的到来，也意味着高龄孕妇的数量将随之增加，再加上客观存在的婚育年龄推迟的情形，都可能使得出生缺陷率和不孕不育的风险率增加，而辅助生殖技术的出现正好可以解决这些难题，帮助提升生育质量和生育率。

什么是辅助生殖？

辅助生殖技术（包括人类辅助生殖技术和人类精子库）是指运用医学技术和方法对配子、合子、胚胎进行人工操作，以达到受孕目的的技术，分为人工授精技术、体外受精－胚胎移植技术及相关衍生技术【1】。

其中体外受精-胚胎移植技术及其各种衍生技术（In vitro fertilization, IVF）近些年来备受关注。简单的说，就是大家耳熟能详的试管婴儿技术。

“试管婴儿”的前世今生？

1978年世界上首例试管婴儿诞生，从此开创了生殖医学领域的新纪元。

试管婴儿是指从女性体内取出卵子，在器皿内培养后，加入经技术处理的精子，待卵子受精后，继续培养，到形成早早期胚胎时，再转移到子宫内着床，发育成胎儿直至分娩的技术【1】。

试管婴儿技术的分类

第三代试管婴儿的分类

为什么选择pGT-A？

虽然试管婴儿技术给不孕不育的夫妇带来了希望，但胚胎染色体数目异常在常规体外受精中较常发生，且高龄女性胚胎染色体异常的发生率更高。

pGT-A技术，对植入前的胚胎细胞进行染色体非整倍体以及染色体拷贝数变异检测，选择染色体数目正常的胚胎，可有效提高体外受精的成功率，有助于辅助生殖技术的推广应用。

pGT-A的研究方法

前几年主要通过荧光原位杂交（FISH）技术、比较基因组杂交芯片（aCGH）技术进行pGT-A分析。随着二代测序（NGS）的快速发展，人们将目光转向NGS方法，以期进行更正确的评估。

pGT-A研究的难点之一是选择合适的单细胞全基因组扩增技术

基于NGS技术进行pGT-A研究时，由于每个胚胎细胞中的DNA非常少（皮克级），远没有达到测序所需的样品量，因此需要先对单细胞内的DNA进行全基因组扩增（whole genome amplification, WGA），而这一过程必须尽可能避免样本的损失和污染，并尽可能保证扩增的覆盖度、均一性等，这都是极其困难的，所以选对单细胞全基因组扩增技术很重要！

Takara致力于通过卓越的技术为科学研究提供支持，倾力推出的picopLEX技术，目前广泛用于pGT-A研究。接下来让我们一起来看一下

picopLEX技术是如何正确而高效的进行pGT-A研究

操作简便，避免珍贵样品的损失

整个实验过程是 “飞一般的感觉”（见下图），就三小时，就三步（细胞裂解→预扩增→低背景的pCR扩增），便可获得微克级的DNA产物。过程中不需要转管和纯化，减少过多实验操作可能带来的样本损失！

炫酷的“准线性预扩增+发夹结构”加持，保证扩增的均一性

在经过细胞裂解后，以DNA作为模板使用准线性扩增方法进行预扩增，并在每个循环最后形成一个不能被进一步扩增的发夹结构，这样做的好处是有效避免pCR过程中可能引入的扩增错误无限放大，避免序列偏向性。

可用于高品质的染色体变异（CNV）分析

利用单卵裂球活体组织检查样品进行picopLEX WGA Kit扩増标记后，与24 sure array杂交，结果清晰地显示了CNV（上图）。2011年ESHRE（欧洲人类生殖与胚胎学会）的临床实验证明了采用picopLEX 技术进行人类染色体核型分析的准确性。

实例大公开：进行pGT研究时，picopLEX性能出色

来自西班牙Sistemas Genómicos Ltd.的Vendrell【2】的团队，开发了一种高度可靠的检测单个卵裂球和5-10滋养外胚层细胞样品的染色体异倍性的实验方法。其中使用picopLEX试剂盒扩增获得gDNA产物用于后续NGS分析。实验表明，未扩增的对照DNA样品和来自单个卵裂球的WGA产物在测序数据上基本没有差异，且可以正确地检测染色体异倍性。表明使用picopLEX技术具有高再现性，适用于pGT-A分析。

Takara提供的pGT-A高通量测序解决方案

产品名称

Code No

包装量

产品类型

picopLEX WGA Kit

R30050

50 Rxns

单细胞全基因组扩增试剂盒

R300644

500 Rxns

ThrupLEX DNA-Seq HV

R400741

24 Rxns

DNA建库试剂盒

R400740

96 Rxns

ThrupLEX DNA-Seq HV pLUS Kit

R400782

24 Rxns

含酶切片段化模块的DNA建库试剂盒

R400783

96 Rxns

参考信息及文献来源

1.中华人民共和国国家卫生健康委员会官网
2.Vendrell, X. et al. New protocol based on massive parallel sequencing for aneuploidy screening of preimplantation human embryos. Syst. Biol. Reprod. Med. 63, 162–178 (2017).